የግራም እድፍ፡ ቴክኒክ እና ቲዎሬቲካል ማብራሪያ

2024 ደራሲ ደራሲ: Angel Austin | [email protected]. ለመጨረሻ ጊዜ የተሻሻለው: 2023-12-17 05:15

የግራም እድፍ በማይክሮባዮሎጂ በሰፊው ጥቅም ላይ ይውላል ምክንያቱም ባክቴሪያን በሴል ግድግዳ ስብጥር ላይ በመመስረት ለመለየት ቀላሉ መንገዶች አንዱ ነው። እንደ ግራም, ሁሉም ባክቴሪያዎች ግራም-አዎንታዊ (ግራም (+)) እና ግራም-አሉታዊ (ግራም (-)) ሊከፋፈሉ ይችላሉ. የግራም እድፍ ዘዴ በ1884 የተፈጠረ ሲሆን ከዚያን ጊዜ ጀምሮ ተወዳጅነቱን አላጣም፣ ምንም እንኳን ብዙ ጊዜ ተስተካክሏል።

የህዋስ ግድግዳ መዋቅር

የግራም ቀለም ባክቴሪያ ግራም-አዎንታዊ ወይም ግራም-አሉታዊ መሆኑን ያሳያል። የባክቴሪያዎችን ወደ ግራም (+) እና ግራም (-) መከፋፈል የሚከናወነው በሴሎቻቸው ግድግዳ መዋቅር መሰረት ነው።

የህዋስ ግድግዳ ከፍተኛ መጠን ያለው peptidoglycan (murein) - ውስብስብ ንጥረ ነገር ይዟል፣ እሱም ፔፕታፔፕታይድ እና ግሊካንን ያጠቃልላል። ግላይካን በ β-1 እርስ በርስ የተያያዙ የ N-acetylglucosamine እና N-acetylmuramic አሲድ ተለዋጭ ቅሪቶችን ያካትታል.4-glycosidic ቦንዶች. Peptidoglycan የሕዋስ ቅርጽ ጥገናን፣ የአስማት መከላከያ እና አንቲጂኒክ ተግባራትን ይሰጣል።

በግራም-አዎንታዊ እና ግራም-አሉታዊ ባክቴሪያዎች መካከል ዋና ልዩነቶች

የተለያዩ ባክቴሪያዎች የተለያዩ የፔፕቲዶግላይካን ንብርብር ውፍረት አላቸው። ግራም-አወንታዊ ተብለው በተመደቡ ባክቴሪያዎች ውስጥ ከ15 እስከ 80 nm ይደርሳል፣ በግራም-አሉታዊነት ደግሞ ከ2 እስከ 8 nm ነው። በተመሳሳይ ጊዜ ግራም-አሉታዊ ባክቴሪያዎች በ peptidoglycan ንብርብር ስር ልዩ መዋቅር አላቸው, ግራም-አዎንታዊ ባክቴሪያዎች የላቸውም - የፔሪፕላስሚክ ክፍተት. ይህ ቦታ በሃይድሮሊክ ኢንዛይሞች የተሞላ ነው - β-lactamase, ribonuclease 1, phosphatase. ግራም-አሉታዊ ባክቴሪያዎችን ለብዙ አንቲባዮቲኮች የመቋቋም ኃላፊነት ያለባቸው እነዚህ ኢንዛይሞች ናቸው።

ግራም(-) የፔፕቲዶግላይካን የባክቴሪያ ሽፋን ከሊፖፖሊሳካራይድ፣ ኢንዶቶክሲን ከያዘ አንቲጂኒክ መዋቅር ጋር የተያያዘ ነው። በ ግራም(+) ባክቴሪያ ውስጥ ቴክኮይክ አሲዶች ተመሳሳይ ተግባራትን ያከናውናሉ።

ግራም-አሉታዊ ባክቴሪያዎች ተጨማሪ መዋቅር አላቸው - የውጨኛው ሽፋን።

የማቅለሚያ ዘዴው ይዘት

መበከል ከመጀመርዎ በፊት የተጠኑ ባክቴሪያዎች ስሚር ይዘጋጃሉ። ይህንን ለማድረግ ውሃ በመስታወት ስላይድ ላይ ይንጠባጠባል እና ረቂቅ ተሕዋስያን ባህል እዚያ በባክቴሪያ ዑደት ይታከላል። ከዚያም ውሃው ሙሉ በሙሉ ከደረቀ በኋላ ስሚር ይስተካከላል - የመስታወት ስላይድ በቃጠሎው እሳቱ ላይ ብዙ ጊዜ ይካሄዳል. የግራም ቀለም ከቀጥታ ባክቴሪያ ቀለም የበለጠ ውጤታማ ነው - ቀለም ሞለኪውሎች ከሞቱ ሴሎች ጋር በተሻለ ሁኔታ ይያያዛሉ።

መቀባት በበርካታ ደረጃዎች ይከናወናል፡

1. ትናንሽ የማጣሪያ ወረቀቶች በቋሚ ስሚር ላይ ይቀመጣሉ እና ዋናው ቀለም ይፈስሳል - የጄንታይን ቫዮሌት ወይም ሚቲሊን ሰማያዊ።
2. ከ3-5 ደቂቃዎች በኋላ ባለቀለም የተጣራ ወረቀቱን ያስወግዱ እና ስሚርን በሉጎል መፍትሄ ለ1 ደቂቃ ይሙሉ። በዚህ ሁኔታ ዝግጅቱ ይጨልማል።
3. የሉጎል መፍትሄ ፈሰሰ እና ስሚሩ በንጹህ ኤቲል አልኮሆል ይታከማል: ጥቂት ጠብታዎች ወደ ዝግጅቱ ይንጠባጠቡ, ከ 20 ሰከንድ በኋላ ይፈስሳሉ. ሂደቱ ከ2-3 ጊዜ ተደግሟል።
4. የሙከራ ስላይድ በተጣራ ውሃ ያጠቡ።
5. ተጨማሪ ማቅለሚያ ያመርቱ - ዝግጅቱን በ fuchsin ይጨርሱ። ከ1-2 ደቂቃዎች በኋላ ቀለሙ ታጥቧል።
6. ውሃው ከደረቀ በኋላ ስሚርን በአጉሊ መነጽር ይፈትሹ። ግራም-አዎንታዊ ባክቴሪያዎች ሰማያዊ-ቫዮሌት፣ ግራም-አሉታዊ ባክቴሪያዎች ሮዝ ወይም ቀይ ይሆናሉ።

የተለያዩ ማቅለሚያዎች መንስኤዎች

ከላይ እንደተገለፀው ግራም-አወንታዊ ባክቴሪያን ሰማያዊ-ቫዮሌትን ሲያቆሽሽ ግራም-አሉታዊ ባክቴሪያ ቀይ ወይም ሮዝ ያቆማል። በዚህ ዘዴ የባክቴሪያዎች ልዩነት ምክንያት የሚሟሟ የጄንታይን ቫዮሌት ወደ ሴል ውስጥ ከገባ በኋላ ቀለሙ ወደማይሟሟ የአዮዲን ቅርጽ ውስጥ ስለሚገባ ነው. ከኤቲል አልኮሆል ጋር ተህዋሲያን በሚታከሙበት ጊዜ ቅባቶች ከሽፋኑ ውስጥ በዚህ የዋልታ ያልሆነ ፈሳሽ ተግባር ውስጥ ይወጣሉ ። ከዚያ በኋላ ሽፋኑ የተቦረቦረ ይሆናል እና ከአሁን በኋላ ለማቅለም ጉልህ እንቅፋት አይሆንም። ቢሆንምpeptidoglycan አልኮልን ጨምሮ ከፖላር ያልሆኑ ፈሳሾች የበለጠ ይቋቋማል። ቀለም እንዳይታጠብ የሚከለክለው እሱ ነው፣ስለዚህ ጥቅጥቅ ያለ የሙሬይን ሽፋን ያላቸው ባክቴሪያዎች ወደ ሰማያዊ-ቫዮሌት (ግራም-ፖዚቲቭ) ይለወጣሉ እና በአልኮል ከታከሙ በኋላ ቀለማቸውን አይቀይሩም።

ቀጭን የሙሬይን ሽፋን ግራም-አሉታዊ ባክቴሪያ በሴል ውስጥ የሚገኙትን ቀለም ሞለኪውሎች መያዝ ስለማይችል አልኮል ከተወሰደ በኋላ ቀለም አልባ ይሆናሉ - እድፍ ግራም-አሉታዊ።

ስሚርን ለ fuchsin ከተጋለጡ በኋላ ግራም-የያዙ ባክቴሪያዎች ሰማያዊ-ቫዮሌት ይቀራሉ፣ ግራም-አሉታዊ ባክቴሪያዎች ደግሞ ሮዝ-ቀይ ይሆናሉ።

የግራም(+) እና ግራም(-) ባክቴሪያ ምሳሌዎች

ግራም-አሉታዊ ባክቴሪያዎች ሳይያኖባክቴሪያ፣ ሰልፈር ባክቴሪያ፣ ብረት ባክቴሪያ፣ ክላሚዲያ፣ ሪኬትሲያ፣ አሴቲክ ባክቴሪያ፣ ብዙ ሜቲሎባባክቴሪያ፣ ቲዮኒክ ባክቴሪያ፣ አርሴኒቶባክቴሪያ፣ ካርቦክሲባክቴሪያ።

Bifidobacteria፣ብዙ የውሃ ውስጥ ባክቴሪያዎች፣ስትሬፕቶኮኪ እና ስታፊሎኮኪዎች ግራም-አዎንታዊ ናቸው።