ኦርጋኒክ ባልሆኑ እና ኦርጋኒክ ሚዲያዎች ብርሃንን መምጠጥ እና እንደገና መለቀቅ የፎስፈረስሴንስ ወይም የፍሎረሰንስ ውጤት ነው። በክስተቶቹ መካከል ያለው ልዩነት በብርሃን መምጠጥ እና በዥረቱ ልቀት መካከል ያለው የጊዜ ርዝመት ነው። ከፍሎረሰንት ጋር፣ እነዚህ ሂደቶች በአንድ ጊዜ ማለት ይቻላል፣ እና ከፎስፈረስሴንስ ጋር፣ ከተወሰነ መዘግየት ጋር ይከሰታሉ።
ታሪካዊ ዳራ
በ1852 የብሪታኒያው ሳይንቲስት ስቶክስ ለመጀመሪያ ጊዜ የፍሎረሰንስን ገልፆ ነበር። በአልትራቫዮሌት ብርሃን ሲጋለጥ ቀይ ብርሃን በሚያመነጨው ፍሎረስፓር ባደረገው ሙከራ አዲሱን ቃል ፈጠረ። ስቶክስ አንድ አስደሳች ክስተት ተመልክቷል። የፍሎረሰንት ብርሃን የሞገድ ርዝመት ሁልጊዜ ከማነቃቂያ ብርሃን የበለጠ እንደሚረዝም ተረድቷል።
መላምቱን ለማረጋገጥ በ19ኛው ክፍለ ዘመን ብዙ ሙከራዎች ተካሂደዋል። የተለያዩ ናሙናዎች ለአልትራቫዮሌት ብርሃን ሲጋለጡ ፍሎረሰሰ መሆኑን አሳይተዋል። ቁሶች፣ ከሌሎች ጋር፣ ክሪስታሎች፣ ሙጫዎች፣ ማዕድናት፣ ክሎሮፊል፣የመድኃኒት ጥሬ ዕቃዎች, ኦርጋኒክ ያልሆኑ ውህዶች, ቫይታሚኖች, ዘይቶች. ማቅለሚያዎችን ለባዮሎጂካል ትንተና በቀጥታ መጠቀም የጀመረው በ1930
ብቻ ነው።
Fluorescence ማይክሮስኮፒ መግለጫ
በ20ኛው ክፍለ ዘመን የመጀመሪያ አጋማሽ ለምርምር ጥቅም ላይ የዋሉት አንዳንድ ቁሶች በጣም ልዩ ነበሩ። በንፅፅር ዘዴዎች ሊገኙ የማይችሉ አመልካቾች ምስጋና ይግባቸውና የፍሎረሰንት ማይክሮስኮፕ ዘዴ በሁለቱም ባዮሜዲካል እና ባዮሎጂካል ምርምር ውስጥ አስፈላጊ መሳሪያ ሆኗል. የተገኘው ውጤት ለቁስ ሳይንስ ትንሽ ጠቀሜታ አልነበረውም።
የፍሎረሰንስ ማይክሮስኮፒ ጥቅሞች ምንድ ናቸው? በአዳዲስ ቁሳቁሶች እርዳታ በጣም ልዩ የሆኑ ሴሎችን እና ጥቃቅን ጥቃቅን ክፍሎችን መለየት ተችሏል. የፍሎረሰንት ማይክሮስኮፕ ነጠላ ሞለኪውሎችን ለመለየት ያስችልዎታል. የተለያዩ ማቅለሚያዎች በአንድ ጊዜ ብዙ ንጥረ ነገሮችን እንዲለዩ ያስችሉዎታል. ምንም እንኳን የመሳሪያዎቹ የቦታ መፍታት በዲፍራክሽን ገደብ የተገደበ ቢሆንም, በተራው, በናሙናው ልዩ ባህሪያት ላይ የተመሰረተ ነው, ከዚህ ደረጃ በታች ያሉ ሞለኪውሎችን ማግኘትም በጣም ይቻላል. የተለያዩ ናሙናዎች ከጨረር በኋላ autofluorescence ያሳያሉ. ይህ ክስተት በፔትሮሎጂ፣ እፅዋት፣ ሴሚኮንዳክተር ኢንዱስትሪ ውስጥ በሰፊው ጥቅም ላይ ይውላል።
ባህሪዎች
የእንስሳት ቲሹዎች ወይም በሽታ አምጪ ተህዋሲያን (microorganisms) ጥናት ብዙ ጊዜ በጣም ደካማ ወይም በጣም ጠንካራ ባልሆነ አውቶፍሎረሰንስ ውስብስብ ነው። ሆኖም ፣ በ ውስጥ ያለው ዋጋምርምር በተወሰነ የሞገድ ርዝመት የተደሰቱ እና የሚፈለገውን የብርሃን ፍሰት የሚያመነጨውን ንጥረ ነገር መግቢያ ያገኛል። Fluorochromes ከህንፃዎች (የማይታዩ ወይም የማይታዩ) እራስን ማያያዝ የሚችሉ እንደ ማቅለሚያዎች ይሠራሉ. በተመሳሳይ ጊዜ፣ ከዒላማዎች እና ከኳንተም ምርት አንፃር በከፍተኛ ምርጫ ተለይተዋል።
Fluorescence ማይክሮስኮፒ ከተፈጥሮ እና ሰው ሠራሽ ማቅለሚያዎች መምጣት ጋር በስፋት ጥቅም ላይ ውሏል። የተወሰኑ የልቀት እና የማነቃቂያ ጥንካሬ መገለጫዎች ነበሯቸው እና በተወሰኑ ባዮሎጂያዊ ኢላማዎች ላይ ያነጣጠሩ ነበሩ።
የግለሰብ ሞለኪውሎች መለየት
ብዙውን ጊዜ፣ ተስማሚ በሆኑ ሁኔታዎች ውስጥ፣ የአንድን ንጥረ ነገር ብርሃን መመዝገብ ይችላሉ። ይህንን ለማድረግ ከሌሎች ነገሮች በተጨማሪ በበቂ ሁኔታ ዝቅተኛ የመመርመሪያ ድምጽ እና የኦፕቲካል ዳራ ማረጋገጥ አስፈላጊ ነው. አንድ የፍሎረሰንት ሞለኪውል በፎቶ bleaching ምክንያት ከመጥፋቱ በፊት እስከ 300,000 ፎተቶን ሊያመነጭ ይችላል። በ20% የመሰብሰቢያ መጠን እና የሂደት ቅልጥፍና፣ በ60 ሺህ ገደማ
ሊመዘገቡ ይችላሉ።
Fluorescence ማይክሮስኮፒ፣ በአቫላንሽ ፎቶዲዮዶች ወይም በኤሌክትሮን ብዜት ላይ የተመሰረተ፣ ተመራማሪዎች የግለሰብን ሞለኪውሎች ባህሪ ለሰከንዶች እና በአንዳንድ ሁኔታዎችም ደቂቃዎች እንዲመለከቱ ፈቅዷል።
አስቸጋሪዎች
ቁልፉ ችግሩ ከእይታ ዳራ የሚመጣውን ድምጽ ማፈን ነው። በማጣሪያዎች እና ሌንሶች ግንባታ ውስጥ ጥቅም ላይ የዋሉት አብዛኛዎቹ ቁሳቁሶች አንዳንድ autofluorescenceን ስለሚያሳዩ በመጀመሪያዎቹ ደረጃዎች ውስጥ የሳይንስ ሊቃውንት ጥረቶች በማውጣት ላይ ያተኮሩ ነበሩዝቅተኛ ፍሎረሰንት ያላቸው አካላት. ሆኖም ፣ ከዚያ በኋላ የተደረጉ ሙከራዎች አዲስ መደምደሚያ ላይ ደርሰዋል። በተለይም በአጠቃላይ ውስጣዊ ነጸብራቅ ላይ የተመሰረተ የፍሎረሰንት ማይክሮስኮፒ ዝቅተኛ ዳራ እና ከፍተኛ አበረታች የብርሃን ውጤት ተገኝቷል።
ሜካኒዝም
በአጠቃላይ የውስጥ ነጸብራቅ ላይ የተመሰረተ የፍሎረሰንስ ማይክሮስኮፒ መርሆዎች በፍጥነት በመበስበስ ወይም በማይሰራጭ ሞገድ መጠቀም ነው። ከተለያዩ የማጣቀሻ ኢንዴክሶች ጋር በመገናኛ ብዙሃን መካከል ባለው በይነገጽ ላይ ይነሳል. በዚህ ሁኔታ, የብርሃን ጨረሩ በፕሪዝም ውስጥ ያልፋል. ከፍተኛ የማጣቀሻ መረጃ ጠቋሚ አለው።
ፕሪዝም ከውሃ መፍትሄ ወይም ዝቅተኛ መለኪያ ብርጭቆ አጠገብ ነው። የብርሃን ጨረሩ ከወሳኙ በላይ በሆነ አንግል ላይ ከተመታ, ጨረሩ ከመገናኛው ላይ ሙሉ በሙሉ ይንጸባረቃል. ይህ ክስተት በተራው, የማይሰራጭ ሞገድ ይፈጥራል. በሌላ አነጋገር ከ200 ናኖሜትሮች ባነሰ ርቀት ዝቅተኛ ሪፍራክቲቭ ኢንዴክስ ያለው መካከለኛ ዘልቆ የሚገባ ኤሌክትሮማግኔቲክ መስክ ይፈጠራል።
በማይሰራጭ ሞገድ ውስጥ፣ የብርሃን መጠኑ ፍሎሮፎሮችን ለማነሳሳት በቂ ይሆናል። ነገር ግን, ለየት ያለ ጥልቀት በሌለው ጥልቀት ምክንያት, መጠኑ በጣም ትንሽ ይሆናል. ውጤቱ ዝቅተኛ ደረጃ ዳራ ነው።
ማሻሻያ
Fluorescence ማይክሮስኮፒ በጠቅላላ ውስጣዊ ነጸብራቅ ላይ የተመሰረተ በኤፒ-ኢሉሚሽን ሊረጋገጥ ይችላል።ይህ የጨመረው የቁጥር ቀዳዳ (ቢያንስ 1.4, ግን ወደ 1.45-1.6 መድረሱ የሚፈለግ ነው), እንዲሁም በከፊል ብርሃን ያለው የመሳሪያው መስክ ያላቸው ሌንሶች ያስፈልገዋል. የኋለኛው ደግሞ በትንሽ ቦታ ላይ ይደርሳል. ለበለጠ ተመሳሳይነት, ቀጭን ቀለበት ጥቅም ላይ ይውላል, በየትኛው የፍሰቱ ክፍል ተዘግቷል. አጠቃላይ ነጸብራቅ ከተከሰተ በኋላ ወሳኝ አንግል ለማግኘት፣ በሌንስ ውስጥ ያለው የመጥመቂያው መካከለኛ ከፍተኛ የንፅፅር ደረጃ እና የማይክሮስኮፕ ሽፋን መስታወት ያስፈልጋል።
